ANTICORPS MONOCLONAL DE SOURIS À LA CHAÎNE LOURDE DE MYOSINE
CARDIAQUE
Désignation de l'hybridome : 3-48
Partenaires de fusion
L'anticorps a été obtenu par la fusion en présence de polyéthylène glycol de cellules
non sécrétrices d'un myélome de souris (P3X63.Ag8.653) avec des cellules de la rate
d'une souris Balb/c immunisée avec de la myosine ventriculaire humaine. Des hybridomes
ont été sélectionnés en milieu HAT, testés par la méthode E.L.I.S.A. pour
déterminer leur spécificité antigénique puis sous-clonés plusieurs fois par dilution
limite. Le clone a été propagé in vitro en culture cellulaire en phase stationnaire, en
présence de sérum fétal bovin. Des banques de cellules maîtresses et de travail
d'hybridomes 3-48 ont été créées et testées pour déceler la présence d'agents
adventices, selon les directives "Points to Consider" de la FDA, 1987.
CARACTÉRISTIQUES DE L'ANTICORPS
| . Classe d'immunoglobuline : |
IgG1, k
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| · Point isoélectrique : |
pH 7.35-6.55
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| · Poids moléculaire de IgG : |
Selon SDS-PAGE dans des conditions
de réduction au mercaptoéthanol 153.8 kd
Chaîne lourde 49,7 kd
Chaîne
légère 27,2 kd.
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| . Poids moléculaire duF(ab')2 |
Selon
SDS-PAGE dans des conditions de réduction au mercaptoéthanol 116 kd
Chaîne lourde
30,8 kd
Chaîne
légère 27,2 kd. |
| . Production de
l'anticorps |
Un
surnageant de culture tissulaire de grade clinique a été produit dans un bioréacteur
perfusé de type membrane, selon les BPF. L'anticorps sécrété
dans le surnageant de culture tissulaire a été concentré et purifié jusqu'à
homogénéité par une série d'étapes chromatographiques. L'immunoglobuline a ensuite
été fragmentée en F(ab')2 par dégradation protéolytique puis réduite à
l'état de Fab' par cystéine.
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| . Préparation de la
trousse |
Les
fragments Fab' 3-48 purs ont d'abord été "pré-traités à l'étain", l'étain
excédentaire a été retiré et les fragments d'anticorps ont été formulés en
présence d'un réducteur de technétium, distribués en flacons stériles, puis
lyophilisés. Aux fins de radiomarquage, le contenu des flacons
est reconstitué avec du 99mTc fraîchement élué du générateur, puis après
30 minutes d'incubation à température ambiante, il est prêt pour l'injection i.v.
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| . Constantes
d'affinité pour : |
Antigen |
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IgG |
Fab' |
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Chaînes lourdes de myosine
ventriculaire humaine |
3.33 x 108M-1 |
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Chaînes lourdes de myosine
auriculaire humaine |
1.48 x 108M-1 |
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Myosine de muscle squelettique
humain |
1.06 x 108M-1 |
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Chaînes lourdes de myosine
cardiaque canine |
2.06 x 108M-1 |
1.2 x 107M-1 |
| . Spécificité
immunologique : |
L'anticorps monoclonal est
spécifique aux chaînes lourdes de myosine a et b . Par transfert de type western et par
méthode E.L.I.S.A., l'anticorps réagit avec les chaînes lourdes purifiées de myosine
auriculaire et ventriculaire isolées à partir de tissus cardiaques humains, canins,
bovins, porcins, murins, de lapin et de rat. Il se lie à la bande A des filaments épais
de la myosine de muscle squelettique et cardiaque, tel que déterminé par
immunofluorescence indirecte sur des coupes cryogéniques, et par la coloration indirecte
à l'immunoperoxidase de tissus fixés par la méthode de Carnoy. Il colore les myocytes
humains et canins en culture tel que déterminé par immunofluorescence indirecte. |
| . Activité croisée |
L'anticorps
3-48 présente une activité croisée avec les chaînes lourdes de myosine humaine
isolées à partir de : muscle squelettique à contraction lente, muscle squelettique à
contraction rapide, muscle oculaire, et peptide streptococcique M5. Il ne réagit pas avec
les plaquettes sanguines humaines, les chaînes lourdes de myosine de muscle lisse, les
chaînes légères de myosine, les fragments de myosine en circulation dans le sang de
patients ayant subi un infarctus du myocarde, et ne réagit pas avec tout autre antigène
de tissu humain ni avec les cellules sanguines. |
| . Storage : |
Store at 4oC.
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| . Stabilité |
IgG |
Reconstituée
en solution aqueuse, l'immunoglobuline G (IgG) demeure stable pendant six mois à une
température de +4N C. Aucune perte d'activité considérable n'a été détectée
si elle est conservée à -70N C pendant deux ans. |
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F(ab')2 |
Reconstitués
en solutions aqueuses et entreposé à + 4N C, les fragments F(ab')2 demeurent
stables pendant six mois, sans perte d'activité perceptible. Conservés à - 20N C, les
fragments F(ab')2 demeurent stables pendant un an. |
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CVTM |
Stable
pendant un an sous forme lyophilisée, à + 4N C (études en cours). |
| . Forme : |
Lyophilisée
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| . Format: |
- 1 mg/flacon SKU #: 76250
- 5 mg/flacon SKU #: 76255
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