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TROUSSE
ELISA
POUR LE DOSAGE
DE L'ACIDE OKADAÏQUE
INTRODUCTION
L'acide okadaïque est sécrété en grande concentration par des dinoflagellates
marins du genre dinophysis lors de la pleine floraison, appelée "marée rouge"
en raison de la coloration caractéristique de l'eau à cette époque. D'abord
isolée de l'Halichondria Okadaic (Tachibana et. Al., 1981), cette toxine acidique
naturelle cause, chez l'homme, un empoisonnement diarrhéique aux fruits de mer
après l'ingestion de fruits de mer dans lesquels cette toxine s'est accumulée.
De façon fonctionnelle, l'acide okadaïque produit ses effets par inhibition
spécifique des phosphatases sérine / thréonine de type 1 (PP1) et 2A (pp2A)
dans les tissus et organes affectés. La promotion tumorale par l'acide okadaïque
peut avoir lieu par l'intermédiaire de l'inhibition de ces phosphatases, résultant
dans l'augmentation de la phosphorylation protéinique et l'expression subséquente
de gènes de prolifération cellulaire. Il a été démontré que l'acide okadaïque
induit la libération du facteur-a de nécrose tumorale de souris provenant de
cellules BALB/3T3 (Fujiki et. Al., 1994) et induit l'augmentation et l'inhibition
de la stimulation adrénergique bêta 2 de l'accumulation de cAMP dans les cellules
d'hématocarcome S49 (Friedman et. Al., 1993).
Au cours des deux dernières décennies, l'ingestion d'acide okadaïque a donné
lieu à des dizaines de milliers d'épisodes d'intoxication en Europe, en Amérique
du Sud, à Hawaii, au Chili, en Indonésie et aux États-Unis (Worms & Bourque,
1988). Compte tenu du potentiel de promotion tumorale de l'acide okadaïque et
de l'incidence élevée de consommation de mollusques contaminés, il existe un
besoin réel d'une méthode de dosage et de détection de l'acide okadaïque précise,
sensible et fiable.
ELISA POUR LE DOSAGE DE L'ACIDE OKADAÏQUE
ERFA Bio-Tech a mis au point une technique ELISA (dosage par méthode immunoenzymatique)
pour le dosage de l'acide okadaïque dans les extraits de mollusques et les
échantillons de planctons d'eau douce.
Cette technique ELISA concurrentielle utilise un anticorps monoclonal comme
anticorps de capture et un anti-antisérum de souris d'affinité conjugué au
peroxydase comme anticorps de détection.
L'acide okadaïque hautement purifié est utilisé pour standard de calibrage.
CHAQUE TROUSSE COMPREND :
- Un plateau de 96 puits et 8 x 12 bandes, préenrobé d'un anticorps monoclonal
de capture.
- Un antisérum purifié d'affinité conjugué au peroxydase comme détecteur.
- Trois standards d'acide okadaïque.
- Un ensemble complet des tampons et réactifs nécessaires à la réalisation
d'un test ELISA.
LE DOSAGE COMPREND :
- Mesure de l'acide okadaïque dans une échelle de 9-81 ng/mL
- Sensibilité, reproductibilité, fiabilité, stabilité (Tableau 1).
- Une technique rapide (temps d'incubation de 2,5 h) et relativement simple.
- Corrélation élevée entre l'AO dosé en ELISA et en CHPL (Tableau 2).
Tableau 1
Reproductibilité du dosage pour des échantillons contenant de l'acide okadaïque1.
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Échantillons2
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Jour
|
Nombre de dosages
|
Concentration3 (ug/mL)
|
CV4 (%)
|
| Variabilité intra-dosage |
I
|
2
|
3
|
2,040 ± 1,160
|
8
|
|
3
|
3
|
2,100 ± 0,327
|
16
|
|
4
|
3
|
2,300 ± 0,246
|
10
|
|
5
|
2
|
1,800 ± 0,260
|
14
|
|
II
|
2
|
3
|
1,180 ± 0,028
|
2
|
|
3
|
3
|
0,875 ± 0,035
|
4
|
|
4
|
3
|
1,190 ± 0,050
|
5
|
|
5
|
2
|
0,825 ± 0.106
|
13
|
| Variabilité inter-dosage |
I
|
1-5
|
5
|
2,120 ± 0,197
|
9
|
|
II
|
1-5
|
5
|
1,010 ± 0,156
|
15
|
- Cinq dosages ont été réalisés pendant des jours successifs. Pour évaluer
la variation intra-dosage, 3 dosages ont été complétés les jours 2, 3 et 4
et 2 dosages le jour 5. Tous les dosages ont été exécutés en trois exemplaires.
La variation inter-dosage a été déterminée en comparant la moyenne de chaque
échantillon par rapport à tous les essais.
- Les échantillons étaient constitués d'extraits de méthanol de moules fraîches
préparés selon la méthode de Lee et. al. (4). Les échantillons I et II ont
été piqués respectivement de 2 et 1 ug/mL d'acide okadaïque pur.
- Moyenne ± déviation standard (DS).
- Coefficient de variation = (DS x 100) / moyenne.
Tableau 2
Validité d'ELISA
| Échantillon1 (ng/mL) |
CHPL (ng/mL) |
ELISA2 (ng/mL) |
| Extrait de moule |
25 |
26,5 |
| 50 |
57,0 |
| 100 |
98,0 |
- L'extrait de moule contenant 1 ug/mL d'AO (méthode CHPL) (5) a été dilué
successivement à 25, 50 et 100 ng/mL à la suite de la préparation dans 80
% de méthanol tel que décrit ci-haut.
- Les extraits ont été testés en trois exemplaires.
Relation :
Pente :
Intersection :
Coefficient de corrélation (r) :
r2 :
Nombre d'entrées : |
Linéaire
0,9343
6
0,9944
0,9889
3 |
INDICATIONS
- Détection et dosage de l'acide okadaïque présent dans les mollusques (i.e.
moules, pétoncles) pour l'inspection de routine par l'industrie de la pêche.
- Détection et dosage de l'acide okadaïque produit par les échantillons de
plancton d'eau douce.
CONTRE-INDICATIONS
Cette trousse n'est pas destinée au dosage du DTX-1 ou du DTX-3, même s'il
existe une réactivité croisée légère avec ces toxines.
RÉFÉRENCES
(1) Tachibana et. al., (1981). J. Am. Chem. Soc., 103: pp 2469-71.
(2) Fujuki et. al., (1994). Cancer Detect Prevent 18: pp 1-8.
(3) Friedman et. al., ((1993). J. Biol. Chem. 268(5): pp 3245-50.
(4) Lee et. al., (1987). Agric. Biol. Chem. 51: pp877-51.
NOM DU PRODUIT : ELISA pour le dosage de l'acide okadaïque
SKU # : 76450
Conservation : 2-8 oC
Commande : Tél. : (514) 931-3133
Téléc. : (514) 931-7330
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