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TROUSSE
ELISA
POUR LE DOSAGE D'IgG1, IgG2a, IgG2b
et IgM de souris
ERFA Bio-Tech a mis au point une méthode immunoenzymatique (ELISA) pour le
dosage des sous-classes d'immunoglobuline d'IgG1, IgG2a, IgG2b et IgM dans un
surnageant de tissu en culture, d'ascites, de sérum humain ou d'élutions de
chromatographie sur colonne.
Cette technique immunoenzymatique en double sandwich utilise un anti-antisérum
d'IgG polyclonal de souris comme anticorps de capture et un anti-antisérum de
souris purifié d'affinité couplé au peroxydase comme anticorps de détection.
Des protéines IgG1, IgG2a, IgG2b et IgM d'un myélome murin sont utilisées comme
standard d'étalonnage.
Chaque trousse comprend :
- Un plateau de 96 puits et 12 bandes, préenrobé d'un anticorps polyclonal
de capture.
- Antisérum d'affinité purifié conjugué au peroxydase comme détecteur.
- Standards protéiniques d'IgG1, IgG2a, IgG2b et IgM de souris.
- Un ensemble complet des tampons et réactifs nécessaires à la réalisation
d'un dosage ELISA.
Le dosage mesure :
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L'IgG1 de souris dans une échelle de |
6,25-100 |
ng/mL |
| |
L'IgG2a de souris dans une échelle de |
6,25-100 |
ng/mL |
| |
L'IgG2b de souris dans une échelle de |
12,5-200 |
ng/mL |
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L'IgM de souris dans une échelle de |
12,5-200 |
ng/mL |
Le dosage est sensible, reproductible, fiable et stable.
Tableau 1
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Échantillon testé
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Coefficients de variation (%) % de CV intra-dosage
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% de CV
inter-dosage
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Valeurs obtenues
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Échelle
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Moyenne
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IgG1 dans un surnageant d'hybridome en culture
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5,7-11
|
7,9
|
10,85
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55,6 ug/mL
43,5 ug/mL
47,6 ug/mL
46,0 ug/mL
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IgG1 purifiée sur colonne de protéine A
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4,2-9
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5,6
|
7,3
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2,45 ug/mL
2,9 ug/mL
2,76 ug/mL
2,6 ug/mL
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IgG1 dans ascites non traités
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6,3-15
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9,8
|
9,55
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5,9 ug/mL
6,0 ug/mL
5,6 ug/mL
6,95 ug/mL
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La technique est rapide (temps d'incubation de 2 heures 10 minutes)
et simple à exécuter.
On a observé une bonne concordance entre les concentrations d'Ig mesurées par
ELISA et d'autres méthodes analytiques.
Tableau 2
Comparaison de diverses méthodes de dosage d'IgG1 de souris
| ÉCHANTILLON |
ELISA (mg/mL)
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LOWRY (mg/mL)
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EAC (mg/mL)
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DO280 nm (mg/mL)
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Ascites
Ascites 1 purifiés sur protéine A
Ascites 2 purifiés sur protéine A |
5,2
2,9
1,12
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NA
3,08
1,18
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4,6
NT
NT
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NA
3,0
1,48
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NA = non applicable
NT = non testé
EAC = électrophorèse en acétate de cellulose
Afin de comparer la linéarité des courbes standard de myélome aux courbes de
dilution des échantillons d'essai, des échantillons d'Ig inconnus ont été dilués
successivement en deux volets, testés en ELISA IgG1, et les valeurs (exprimées
en ng/mL) ont été extrapolées à partir de la courbe standard d'IgG1.
Indications
- contrôle de la production d'Ig par des hybridomes dans des tissus en culture,
à petite et grande échelle;
- contrôle de la production d'Ig en ascites;
- dosage de la récupération d'Ig dans les élutions de chromatographie en
colonne lors du processus de purification d'anticorps monoclonal;
- contrôle du niveau d'Ig de souris dans les sérums de patients inoculés
avec des anticorps monoclonaux murins puisque aucune interférence significative
avec le sérum humain normal n'a été décelée avec la trousse;
- dosage d'Ig murine dans le produit final.
Contre-indications
Cette trousse ne peut pas être utilisée pour le dosage d'une sous-classe d'IgG
murine en présence d'autres sous-classes d'IgG murine tel que le sérum de souris
non fractionné.
Dans de tels cas, la concentration d'une sous-classe particulière d'IgG serait
surestimées à cause de l'effet additif de deux anticorps de liaison ou plus
Format: 1 kit SKU #: 76500
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